文献类型： 中文期刊

作者： 段云 ¹ ; 巩中军 ¹ ; 蒋月丽 ¹ ; 吴潇博 ¹ ; 李彤 ¹ ; 苗进 ¹ ; 武予清 ¹ ;

作者机构： 1.河南省农业科学院植物保护研究所河南省农作物病虫害防治重点实验室/农业部华北南部有害生物治理重点实验室

关键词： 粘虫;延伸因子;精氨酸激酶;克隆;反转录实时定量PCR

期刊名称： 中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2016 年 32 卷 11 期

页码： 27-32

收录情况： CSCD

摘要： 为今后利用SYBR GreenⅠ荧光定量法研究粘虫EF-1a和AK基因的表达情况,设计合成用于PCR扩增的引物,运用RT-PCR方法克隆EF-1a和AK基因片段,并进行序列同源性分析;然后采用SYBR GreenⅠ荧光定量法设计特异性引物进行RT-PCR扩增,通过熔解曲线和标准曲线分析等建立实时RT-PCR方法。结果表明,从粘虫中克隆获得EF-1a和AK基因片段长度分别为622 bp和1020 bp,分别编码207个氨基酸和339个氨基酸;序列同源性分析结果表明,粘虫EF-1a与鳞翅目昆虫家蚕、桦尺蠖和柑桔凤蝶的氨基酸序列同源性为95%以上;AK与鳞翅目昆虫草地贪夜蛾、烟蚜夜蛾、棉铃虫、斜纹夜蛾和甜菜夜蛾的氨基酸序列同源性为98%以上。熔解曲线和标准曲线结果显示,设计的EF-1a和AK基因引物均可应用于实时RT-PCR扩增。