文献类型： 中文期刊

作者： 肖长峰 ¹ ; 刘成倩 ² ; 卢永红 ¹ ; 陈斌 ³ ; 吴双林 ³ ; 张天庆 ³ ; 易建中 ³ ;

作者机构： 1.上海海洋大学水产与生命学院

2.内蒙古农业大学动物科学与医学学院

3.上海市农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 轮状病毒;VP4基因;克隆;原核表达

期刊名称： 安徽农业科学

ISSN： 0517-6611

年卷期： 2009 年 37 卷 22 期

页码： 10431-10432+10448

收录情况： 北大核心

摘要： [目的]研究猪的轮状病毒VP4蛋白基因在BL21大肠杆菌中的表达。[方法]以猪肺脏组织中分离的总RNA为模板,采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术扩增VP4蛋白的部分基因,将PCR产物克隆到表达载体pGEX-4T-1中,构建原核表达质粒PGEX-4T-1-VP4并对重组质粒进行酶切和测序鉴定。将重组载体PGEX-4T-1-VP4转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达和SDS-PAGE分析,并对重组大肠杆菌进行可溶性分析。[结果]对猪肺脏组织中分离的总RNA进行RT-PCR扩增,获得875 bp的VP4部分基因,重组质粒PGEX-4T-1-VP4经BamHⅠ和XhoⅠ双酶切和测序鉴定后,插入的猪轮状病毒VP4的cDNA编码区序列与已公布的猪GenBank核酸序列比对结果为99.5%;将重组质粒pGEX-4T-1-VP4-转化至大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约58 kDa融合蛋白带。[结论]该研究为进一步研究轮状病毒的疫苗研制奠定了基础。