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测定化学物对乙酰胆碱酯酶抑制毒性的微板吸光法研究

文献类型： 中文期刊

作者： 陶珊珊 1 ; 葛会林 2 ; 袁宏球 2 ; 阳辛凤 3 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院分析测试中心海南省热带果蔬产品质量安全重点实验室;华中农业大学植物科学技术学院

2.;中国热带农业科学院分析测试中心海南省热带果蔬产品质量安全重点实验室;华中农业大学植物科学技术学院

3.;中国热带农业科学院分析测试中心海南省热带果蔬产品质量安全重点实验室;华中农业大学植物科学技术学院;

关键词： 灭多威;乙酰胆碱酯酶;剂量-效应曲线;微板吸光法;双相关系

期刊名称： 生态毒理学报

ISSN： 1673-5897

年卷期： 2018 年 01 期

页码： 201-209

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 随着化学污染物种类与数量的日益增多,高通量测试方法显得越来越重要。基于乙酰胆碱酯酶(ACh E)抑制法原理,以多功能酶标仪为测试设备,96孔微板为暴露反应载体,建立了测定化学物对ACh E抑制毒性的微板吸光法。系统研究了ACh E浓度、碘化硫代乙酰胆碱(ATCI)浓度、二硫代二硝基苯甲酸(DTNB)浓度对显色吸光度、吸光度变化速率、化学物测试毒性的影响。结果表明,随着ACh E、DTNB、ATCI的浓度增加,吸光度均增加;吸光度变化速率与ACh E浓度呈正相关,与DTNB浓度基本无关,与ATCI浓度呈现先增后减的双相关系;随着ATCI浓度增加,灭多威剂量-效应曲线(DRC)向右移动。最终建立的优化测试条件为DTNB 0.2 g·L~(-1)、ATCI 0.2 g·L~(-1)、ACh E 0.04 U·m L~(-1)、p H 6.8、反应温度29℃及暴露时间15 min;并与国标方法进行了对比与验证,发现试剂加样顺序对毒性测定结果有显著影响。基于ACh E的微板毒性测试结果表明,灭多威的DRC呈现良好的S型曲线,可用Weibull函数有效表征,拟合决定系数R2大于0.97,空白变异控制在了±10%以内。此方法可用于化学污染物的高通量毒性检测。

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