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hAPOB的克隆、原核表达及抗体效价分析

文献类型： 中文期刊

作者： 徐志伟 1 ; 王期 1 ; 徐一然 1 ; 陈永霞 1 ; 徐小波 1 ; 于建宁 1 ;

作者机构： 1.江苏丘陵地区镇江农业科学研究所;南京师范大学生命科学学院;江苏大学土木工程与力学学院;江苏省句容市动物疫病预防控制中心;江苏省农业科学院畜牧研究所

关键词： hAPOB;pGEX-4T-1;抗血清;抗体效价;湖羊

期刊名称： 西南农业学报

ISSN： 1001-4829

年卷期： 2019 年 02 期

页码： 446-450

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】人载脂蛋白B(hAPOB)是保持人体血脂恒定的重要蛋白,检测hAPOB具有重要的临床价值。【方法】本研究将hAPOB(97-526AA)序列连接到原核表达载体pGEX-4T-1中,构建pGEX-4T-1-hAPOB(97-526AA)原核表达质粒,然后将其转入宿主菌BL21,宿主菌表达出与预期分子量大小相符的80 kDa的融合蛋白;将纯化后的融合蛋白免疫湖羊,制备抗hAPOB血清并检测抗体效价。【结果】每次注射0.4 mg的原核表达抗原,湖羊抗血清的产生效果最佳;经间接酶联免疫分析(ID-ELISA)方法检测,原核表达蛋白免疫湖羊得到的hAPOB抗体效价为l︰40000。【结论】本试验获的抗血清能够满足商用标准,为后续拓展其应用奠定了基础。

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