文献类型： 中文期刊

作者： 冯翠莲 ¹ ; 万玥 ² ; 王俊刚 ¹ ; 冯小艳 ¹ ; 赵婷婷 ¹ ; 王文治 ¹ ; 沈林波 ¹ ; 张树珍 ¹ ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所甘蔗研究中心农业农村部热带作物生物技术重点开放实验室

2.南京农业大学生命科学学院

关键词： 抗虫转基因甘蔗;T-DNA侧翼序列;转化事件特异性检测;染色体步移

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2021 年 005 期

页码： 248-258

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 转基因作物外源T-DNA插入的侧翼序列是转基因事件检测的关键组分,也是转基因作物生物安全评价和监管所必需提供的重要信息。为了明确抗虫转基因甘蔗BCG-17的分子特征和建立其事件特异性检测方法,推进其生物安全性评价工作及未来的监管工作,以其T2代为研究材料,通过Southern 杂交检测外源基因在甘蔗基因组内的拷贝数;利用染色体步移技术分离外源基因在甘蔗基因组中插入位点的侧翼序列,并建立该转化体的高效灵敏的特异性PCR检测方法。结果表明:Southern杂交检测证明外源T-DNA以单拷贝方式插入BCG-17株系;经过3-4次的热不对称PCR扩增,分离到510 bp的T-DNA左侧翼序列和915 bp的右侧翼序列;以此为基础,分别设计左右侧翼检测引物,建立了BCG-17株系的转化事件特异性PCR检测方法,左侧翼的PCR检测方法特异性强、灵敏度高,检出极限为0.1%,相当于9个单倍体甘蔗基因组拷贝数。转基因株系BCG-17的分子特征及其转化事件特异性检测的完成,为该转基因甘蔗及其衍生产品的检测和身份识别提供了技术依据。