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人胰岛素样生长因子-Ⅰ基因农杆菌工程菌株的构建

文献类型: 中文期刊

作者: 周鹏 1 ; 王跃进 1 ; 贺普超 1 ;

作者机构: 1.西北农林科技大学园艺学院

关键词: 胰岛素样生长因子-Ⅰ;化学合成;植物表达载体;重组农杆菌;筛选

期刊名称: 西北农林科技大学学报(自然科学版)

ISSN: 1000-2782

年卷期: 2001 年 29 卷 03 期

页码: 19-23

收录情况: 北大核心

摘要: 采用固相亚磷酸三酯法人工化学合成了人胰岛素样生长因子-Ⅰ(huIGF-I)基因的4条寡核苷酸 片段,再通过片段1、2与3、4末端互补配对和Klenow酶促补平及酶切连接成为完整的huIGF-IDNA片段,用 EcoR I/PstI酶切后克隆于 pGEM T-Easy Vector,经测序证明所得 DNA序列与设计的序列完全一致;选用植物 偏爱密码子校正了启始密码子ATG下游的6个密码子,并在ATG处增加Kozak序列后,插入pBI121的BamHI/ SacI位点,构建了以 35S为启动子的植物表达载体;以 Hind II/EcoRI切下“35S-Kozak-IGF-I-NOS(ter.)”插入 pCAMBIA2300之Hind II/EcoR I位点,构建成huIGF-I植物表达载体;通过CaCl2直接转化法将表达载体导入农 杆菌EHA105(Rif.r),并以菌落原位杂交技术和 DNA dot blot对重组农杆菌进行了筛选,所获得的重组农杆菌菌株为培育huIGF-I豆药用植物奠定了基础。

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