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地衣芽胞杆菌碱性蛋白酶基因克隆与表达特性

文献类型： 中文期刊

作者： 许发芝 1 ; 李吕木 1 ; 徐子伟 2 ; 张志才 3 ;

作者机构： 1.安徽农业大学动物科技学院

2.浙江省农业科学院

3.江苏大学食品与生物工程学院

关键词： 地衣芽胞杆菌;碱性蛋白酶基因;克隆;表达特性

期刊名称： 中国微生态学杂志

ISSN： 1005-376X

年卷期： 2011 年 23 卷 07 期

页码： 597-599+604

收录情况： CSCD

摘要： 目的建立高产量和高活力的地衣芽胞杆菌碱性蛋白酶基因表达体系。方法采用PCR技术克隆获得目的基因,将其连入表达质粒pET-32 a构建原核表达重组质粒,经测序鉴定后,转化BL21大肠埃希菌,不同温度下IPTG诱导表达融合蛋白,测定酶活;进一步对该基因和编码蛋白进行同源性比较和酶学性质分析。结果碱性蛋白酶基因序列全长1 149 bp,编码382个氨基酸,同源性为99%,融合蛋白分子质量为62 kD,蛋白酶酶活为29 000 U/mL,并且在25℃时是以可溶蛋白形式表达,37℃时部分蛋白以包涵体形式存在。结论此种表达体系可以成功表达具有生物活性的碱性蛋白酶,诱导温度对蛋白酶存在形式具有较大影响。

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