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转基因油菜W-4T-DNA旁侧序列分析与事件特异性检测(英文)

文献类型： 中文期刊

作者： 陈松 1 ; 申爱娟 1 ; 周晓婴 1 ; 戚存扣 1 ;

作者机构： 1.国家油料作物改良中心南京油菜分中心;农业部长江下游棉花与油菜重点实验室;南京农业大学农学院

关键词： 转基因油菜;旁侧序列;事件特异性检测

期刊名称： Agricultural Science & Technology

ISSN： 1009-4229

年卷期： 2014 年 07 期

页码： 1089-1094

摘要： W-4是通过农杆菌介导法将fad2基因的反向重复序列表达框转入甘蓝型油菜Westar后获得的转基因高油酸油菜品系。为建立W-4的转基因事件特异性PCR检测技术,应用温度不对称PCR(TAIL-PCR)扩增获得转基因油菜W-4的T-DNA插入位点的左、右旁侧序列。其中右边界旁侧序列长度为290 bp,其碱基组成G+C含量为31.27%、A+T含量为68.73%;左边界旁侧序列长度为365 bp,其碱基组成G+C含量为32.6%、A+T含量为67.4%,表明该T-DNA整合在富含AT区。序列比对结果发现,该转基因事件中,T-DNA左边界序列完全整合到油菜基因组中,仅有1个碱基由G转换成了A。而右边界则缺失了包括RB border在内的62个碱基。结果表明:转基因高油酸油菜T-DNA的整合是一次无载体序列的整合。依据左、右边界旁侧序列和转基因载体的T-DNA左右边界序列设计了2对特异性引物TLF/TLR和TRF/TRR,能从W-4基因组DNA中扩增出大小分别为485和405 bp的预期产物,而在其他转基因油菜、非转基因油菜的基因组DNA和空白对照中均无特异性扩增产物,据此建立了W-4的转基因事件特异性PCR检测技术。应用该检测技术可以从含有0.1%W-4基因组DNA的混合样品中扩增出特异产物,检测灵敏度达0.1%。可对W-4的转基因事件进行特异性检测。

  • 相关文献

[1]转基因油菜W-4 T-DNA旁侧序列分析与事件特异性检测. 申爱娟,陈松,周晓婴,戚存扣. 2014

[2]植物转基因整合座位的结构. 姚泉洪,熊爱生,马鸿翔,洪义欢. 2007

[3]转基因甘蓝型油菜品系W-4高油酸性状遗传分析. 申爱娟,陈松,周晓婴,戚存扣. 2013

[4]转基因油菜 W-4 fad_2基因沉默的种子特异性分析（英文）. 陈松,彭琦,周晓婴,高建芹,张维,张洁夫,浦惠明,戚存扣. 2014

[5]转基因抗除草剂油菜相关基因的PCR检测及其在育种中的应用. 浦惠明,戚存扣,张洁夫,陈松,陈峰,高建芹,陈新军. 2006

[6]转基因高油酸甘蓝型油菜新种质的获得. 陈松,浦惠明,张洁夫,高建芹,陈锋,龙卫华,胡茂龙,戚存扣. 2009

[7]油菜抗草丁膦性状的遗传与利用. 浦惠明,高建芹,戚存扣,张洁夫,陈新军,傅寿仲. 2003

[8]农杆菌介导法将fad2基因的ihpRNA表达框转入甘蓝型油菜. 陈松,浦惠明,张洁夫,陈锋,陈新军,龙卫华,戚存扣. 2008

[9]RNAi沉默转基因油菜fad2基因表达的种子特异性分析. 周晓婴,申爱娟,张洁夫,浦惠明,龙卫华,胡茂龙,陈锋,付三雄,顾慧,陈松,戚存扣. 2012

[10]fad2基因下调表达的甘蓝型油菜W-4株系脂肪酸及品质分析（英文）. 陈松,彭琦,高建芹,周晓婴,张洁夫,浦惠明,戚存扣. 2015

[11]转基因高油酸油菜株系W-4种子脂肪酸组成. 陈松,彭琦,高建芹,周晓婴,张维,张洁夫,浦惠明,戚存扣. 2015

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