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人α-乳白蛋白质基因的克隆及其在奶山羊胎儿成纤维细胞中的表达

文献类型： 中文期刊

作者： 苏磊 1 ; 曹少先 1 ; 丰秀静 1 ; 田石 2 ; 孟春花 1 ; 王慧利 1 ; 张庆晓 1 ; 王锋 2 ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院畜牧研究所

2.南京农业大学动物科技学院

关键词： 人α-乳白蛋白质;基因克隆;奶山羊胎儿成纤维细胞;表达

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2012 年 28 卷 03 期

页码： 126-130

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 采用PCR方法从人类基因组DNA中扩增hα-LA基因,将扩增产物克隆到pMD19-T载体,并进行测序验证。通过双酶切法将测序正确的hα-LA亚克隆至真核表达载体pCEP4,构建真核表达载体pCLA并进行酶切鉴定。用脂质体法将pCLA转染至奶山羊胎儿成纤维细胞中,用RT-PCR法检测细胞中hα-LA基因mRNA的表达,用Western-blotting法检测培养上清液中hα-LA蛋白质的表达。结果显示:克隆的hα-LA基因序列完全正确,pCLA酶切鉴定正确,RT-PCR检测到转染细胞中hα-LA基因mRNA的表达,Western-blotting检测到转染细胞培养上清液中hα-LA蛋白质。表明所克隆的hα-LA基因组DNA能够在奶山羊胎儿成纤维细胞中正确转录和翻译。

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