文献类型： 中文期刊

作者： 张磊 ¹ ; 许星鸿 ¹ ; 刘志鸿 ² ; 吴彪 ² ; 周丽青 ² ; 李转转 ² ; 马培振 ² ; 孙秀俊 ² ;

作者机构： 1.江苏海洋大学海洋科学与水产学院

2.海水养殖生物育种与可持续产出全国重点实验室(中国水产科学研究院黄海水产研究所)

关键词： 基因组DNA;D形幼虫;遗传分析;COX1;16SrRNA;菲律宾蛤仔

期刊名称： 渔业科学进展

ISSN： 2095-9869

年卷期： 2025 年 46 卷 004 期

页码： 192-200

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究以菲律宾蛤仔(Ruditapes philippinarum)的D形幼虫和壳顶幼虫为研究对象，建立快速、高效的单个幼虫基因组DNA提取方法，并成功应用于菲律宾蛤仔的遗传学鉴定和单倍型分析。此方法的原理在于通过物理和化学手段破坏细胞结构，释放DNA，并通过热变性和快速冷却步骤实现DNA的收集。进行实验时，先将分离的单个幼虫转移到PCR管中，加入10μL PCR缓冲液，100℃加热5 min，迅速转移到冰盒中，并加入0.5μL蛋白酶K，并振荡混匀，在PCR仪55℃条件消化60 min,100℃加热10 min后，4℃离心并保存DNA。经超微量紫外可见光分光光度仪检测、琼脂糖凝胶电泳分离和DNA序列比对，评价幼虫DNA的质量。结果显示，以幼虫DNA为模板，设计用于扩增16Sr RNA和COX1基因的引物，扩增获得PCR产物的电泳条带清晰，测序验证准确，表明16Sr RNA和COX1均能对菲律宾蛤仔幼虫进行遗传鉴定和单倍型分析，COX1共获得单倍型14个，单倍型多样性为0.937;16Sr RNA共得到单倍型13个，单倍型多样性为0.705。研究结果证实，该方法可从几百微米大小的贝类幼虫中提取高质量的基因组DNA，为贝类幼虫的物种鉴定和遗传学分析提供了一种准确、高效和可靠的方法，在贝类幼虫生态学和遗传育种领域具有广阔的应用前景。