文献类型： 中文期刊

作者： 孙婧陶 ¹ ; 李兆华 ² ; 张宝修 ¹ ; 茹李波 ¹ ; 李钟淑 ¹ ; 方南洙 ¹ ;

作者机构： 1.延边大学农学院/动物遗传育种与繁殖实验室

2.吉林省农业科学院

关键词： 延边奶山羊;H2O2;乳腺上皮细胞;氧化损伤;凋亡

期刊名称： 江苏农业科学

ISSN： 1002-1302

年卷期： 2013 年 41 卷 10 期

页码： 149-152

收录情况： 北大核心

摘要： 为了建立过氧化氢诱导延边奶山羊乳腺上皮细胞(DGMECs)氧化损伤模型,用体外培养的延边奶山羊乳腺上皮细胞传代后进行试验,用DMEM/F12培养基将H2O2稀释为5、50、100、200、500μmol/L,以DMEM/F12培养基作为空白对照组。以H2O2处理4 h后,用MTT法观察H2O2对乳腺上皮细胞活力的影响,用Hoechst33342/PI荧光染色法观察H2O2损伤对乳腺上皮细胞的促凋亡情况,DCFH-DA检测细胞内活性氧(ROS)含量。MTT活性检测结果表明,各处理组的细胞存活率与未处理组差异显著(P<0.05)。5、50、100μmol/L H2O2作用4 h后,细胞存活率分别为91.21、77.50%、54.48%;而200、500μmol/L H2O2作用4 h后,细胞存活率仅为35.53%、27.79%,乳腺上皮细胞死亡过多。Hoechst33342/PI染色结果表明,H2O2通过诱导乳腺上皮细胞的凋亡及坏死来降低细胞的存活率。利用荧光探针DCFH-DA分析DGMECs的ROS水平,结果显示,细胞经H2O2处理后会明显增加细胞内ROS水平。H2O2100μmol/L处理细胞4 h后,约导致50%的细胞死亡,坏死比例小,ROS含量也相对较少,在此浓度下,细胞还具有恢复其功能的可能性,因此选用100μmol/L H2O2处理细胞4 h来建立延边奶山羊乳腺上皮细胞氧化损伤模型。