文献类型： 中文期刊

作者： 李培培 ¹ ; 游雷鸣 ¹ ; 罗俊 ¹ ; 鄂魏 ² ; 蒋志政 ² ; 郅玉宝 ¹ ; 张改平 ¹ ; 王爱萍 ² ;

作者机构： 1.农业部动物免疫学重点开放实验室/河南省动物免疫学重点实验室河南省农业科学院

2.郑州大学生物工程系

关键词： EGFP;H1启动子;RNAi载体;双标记筛选

期刊名称： 中国生物工程杂志

ISSN： 1671-8135

年卷期： 2011 年 31 卷 11 期

页码： 81-89

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用人H1 RNA启动子、EGFP基因及Neomycin抗性基因,构建用于禽类细胞基因持续沉默和快速筛选的实用型RNAi载体。在将pCDNA3.1(+)载体上的SV40启动子替换为鸡源的β-actin启动子后,装入EGFP基因表达框以及用于驱动外源shRNA转录的人H1 RNA启动子,构建成同时具有EGFP和Neomycin抗性双标记的RNAi载体,并为载体引入独特设计的含媒介序列的多克隆位点以方便外源shRNA编码小片断插入后的快速筛选,载体设计非常实用。插入靶向EGFP和sIgMλ基因的shRNA编码序列后分别瞬时转染DF-1和DT40细胞,结果显示靶基因表达得到了明显抑制。联用EGFP和Neomycin双标记快速筛选sIgMλ轻链基因稳定沉默的DT40细胞克隆的结果也证实,H1启动子转录shRNA的干扰效果是高效的,双标记筛选策略不仅有效而且方便、快捷。