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香蕉束顶病毒海口分离物核穿梭蛋白(NSP)的纯化及抗血清制备

文献类型： 中文期刊

作者： 余乃通 1 ; 冯团成 1 ; 王建华 1 ; 刘志昕 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

关键词： 香蕉束顶病毒;核穿梭蛋白;纯化;抗血清制备

期刊名称： 基因组学与应用生物学

ISSN： 1674-568X

年卷期： 2010 年 29 卷 02 期

页码： 375-378

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究以本实验室保存的含重组载体pDEST17-NSP的原核表达菌株E.coli BL21(DE3)为材料,于25℃、0.1mmol/L IPTG条件下诱导4h,集菌后超声波破碎,获得以包涵体形式表达的约20kD的融合蛋白。实验结果表明,将沉淀的融合蛋白溶于含6mol/L尿素的Binding Buffer中,再经Ni2+-NTA亲和层析纯化后,可获得高纯度的融合蛋白。将纯化融合蛋白经12%SDS-PAGE电泳,切胶回收目的带,液氮研磨并按1:1(W/V)混合佐剂,4次免疫家兔,获得BBTV病毒核穿梭蛋白的特异性抗血清。以融合蛋白作抗原,间接ELISA法测定其抗血清效价为1:5000。田间检测样品的最佳抗血清工作浓度为1:500。Western Blot鉴定结果表明抗血清能与目的蛋白特异性结合。本研究的结果将为下一步NSP基因转录调控和蛋白功能研究奠定一定基础。

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