文献类型： 中文期刊

作者： 程胜群 ¹ ; 吕文河 ¹ ; 高艳玲 ¹ ; 白艳菊 ² ; 范国权 ² ; 张威 ² ; 张抒 ² ; 邱彩玲 ² ; 申宇 ² ; 董学志 ² ; 白雅梅 ³ ;

作者机构： 1.东北农业大学农学院

2.黑龙江省农业科学院克山分院

3.东北农业大学资源与环境学院

关键词： 马铃薯S病毒;株系;RT-qPCR;检测;种薯

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2020 年 006 期

页码： 187-194

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为实现准确和快速鉴定PVS及其株系,明确PVS在马铃薯叶片、叶柄、茎、根和休眠块茎中含量以筛选适合的检测部位,设计PVS通用简并引物,建立实时荧光定量PCR（RT-qPCR）技术体系,分析熔解曲线鉴定PVS^O和PVS^A株系。以马铃薯X病毒（PVX）、马铃薯Y病毒（PVY）、马铃薯M病毒（PVM）、马铃薯A病毒（PVA）和马铃薯卷叶病毒（PLRV）阳性样品为对照检测其特异性。应用PVS^O和PVS^A重组质粒分别建立标准曲线,检测接种PVS^O和PVS^A马铃薯品种尤金和冀张薯12号的5个部位PVS含量。另外,应用该体系检测来源于11个省（市、自治区）的90个PVS阳性样品验证其实用性。PVS^O和PVS^A扩增后熔解曲线分别在85.77～86.00℃和87.78～87.91℃出现特异峰,PVS阴性样品及PVX、PVY、PVM、PVA和PLRV阳性样品的熔解曲线均无上述特异峰。PVS^O和PVS^A的标准曲线重组质粒浓度分别在1.09×10⁵～1.09×10⁹拷贝/μL和1.26×10⁵ ～1.26×10⁹拷贝/μL时,荧光信号基线的循环数平均值（Cycle threshold,Ct值）与PVS病毒粒子拷贝数对数之间具有良好的线性关系（决定系数R²=0.994 2和0.991 2）。尤金和冀张薯12号5个部位PVS^O和PVS^A拷贝数均大于10 ⁷数量级,均可用于检测,以PVS^O在叶柄中含量最高。11个省（市、自治区）的90个PVS阳性样品均可检测到。本研究建立的PVS RT-qPCR检测体系快速、准确、特异,并可依据样品熔解曲线鉴定PVS^O和PVS^A株系。叶片、叶柄、茎、根和休眠块茎等5个部位组织均可用于检测,实用性强,可为生产脱毒种薯提供技术支持。