文献类型: 中文期刊
作者: 范玉顶 1 ; 马杰 2 ; 周勇 1 ; 江南 1 ; 刘文枝 1 ; 曾令兵 1 ;
作者机构: 1.中国水产科学研究院长江水产研究所
2.爱达荷大学水产研究所鱼类与野生动物科学系
关键词: 不同基因型草鱼呼肠孤病毒;简并引物;RT-PCR;VP2蛋白;快速检测
期刊名称: 淡水渔业
ISSN: 1000-6907
年卷期: 2018 年 48 卷 006 期
页码: 9-16
收录情况: 北大核心 ; CSCD
摘要: 根据GenBank登录的草鱼呼肠孤病毒(grass carp reovirus,GCRV)不同基因型毒株编码VP2蛋白的S2节段保守序列,设计1对简并引物,通过优化反应条件及灵敏度和特异性评价,建立了一种能同时检测三种基因型GCRV的通用RT-PCR检测方法.结果显示:该方法在三种基因型GCRV中均扩增出大小约590 bp的特异性条带;灵敏度试验结果显示,该方法对于Ⅰ、 Ⅱ、 Ⅲ型GCRV的检测限分别为380、250和380拷贝/μL.该方法可特异性地检测目前已知的三种基因型GCRV,而在大鲵虹彩病毒(GSIV)、 锦鲤疱疹病毒(KHV)、 鲤疱疹病毒Ⅱ型(CyHV-2)、 鲤春病毒血症病毒(SVCV)和传染性脾肾坏死病毒(ISKNV)中无扩增产物.利用该方法检测49份草鱼出血病疑似样品,结果显示均为GCRV阳性,其中I型阳性率为8.2%,Ⅱ型阳性率为85.7%,Ⅲ型阳性率为2%,Ⅰ、 Ⅱ型混合感染阳性率为4.1%,其他类型的混合感染未检测到.结果表明,本研究建立的针对Ⅰ、 Ⅱ和Ⅲ型GCRV的RT-PCR检测方法具有通用性好、 省时高效的突出特点,同时还兼具较高的灵敏度和特异性.
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