文献类型： 中文期刊

作者： 陈世雄 ¹ ; 潘永 ² ; 令狐远凤 ¹ ; 张家莉 ¹ ; 杨婉 ¹ ; 武绍碧 ¹ ; 叶景芬 ¹ ; 杨琦 ¹ ;

作者机构： 1.贵州大学动物科学学院

2.贵州省农业科学院畜牧兽医研究所

关键词： 鼠伤寒沙门菌;λ-Red同源重组;sRNA RybB;Hfq;ompD

期刊名称： 微生物学报

ISSN： 0001-6209

年卷期： 2024 年 004 期

页码： 1263-1273

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】探究小RNA （small RNA, sRNA） RybB和伴侣蛋白Hfq对沙门氏菌孔蛋白OmpD表达的调控作用。【方法】以鼠伤寒沙门菌（SalmonellaTyphimurium,STM）为研究对象，将含有编码β-半乳糖苷酶的lacZ报告基因的pCE40质粒转入ompD基因单缺失菌株中以获得lacZ报告菌株；在此基础上，利用P22噬菌体转导技术分在lacZ报告菌株中构建rybB全序列缺失、hfq全序列缺失、hfq点序列敲除和hfq序列截短以获得双突变实验菌株，以及rybB全序列缺失和hfq全序列缺失的三突变实验菌株。通过β-半乳糖苷酶活性试验和RT-qPCR探究sRNA RybB及伴侣蛋白Hfq对孔蛋白OmpD表达的调控作用。【结果】成功在lacZ报告菌中构建rybB全序列缺失、hfq全序列缺失、hfq点序列敲除和hfq序列截短等双缺失实验菌株，以及rybB全序列缺失和hfq全序列缺失的三突变实验菌株。与野生型（wild type, WT）菌株相比，在lacZ报告菌株中，hfq基因截短为87个氨基酸序列的突变株中的OmpD蛋白活性下调了2.16%，其余实验株OmpD蛋白的β-半乳糖苷酶活性均呈上升趋势。与WT菌株相比，实验菌株ompD基因转录水平除了STM LT2?ompD::lacZΔhfq65的上调不具有显著性外，其余实验菌株均显著（P＜0.05）上调，其中lacZ报告菌株、rybB全序列缺失和hfq全序列缺失的三突变实验菌株ompD基因转录水平上调最明显，为1.83倍。【结论】ompD基因的转录及蛋白表达主要受hfq基因和sRNA RybB的负反馈调节；Hfq的远端面在对ompD基因的转录抑制中起关键作用。通过多个基因突变菌株的构建，阐述了sRNA伴侣蛋白Hfq与孔蛋白OmpD的相互作用关系，探索了Hfq对ompD的调控关键区域，丰富了sRNA的调控理论。