文献类型： 中文期刊
作者： 高寒 1 ; 夏斌 2 ; 费小雯 3 ; 李亚军 2 ; 邓晓东 2 ; 余丽芸 1 ;
作者机构： 1.黑龙江八一农垦大学生命科学技术学院
2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所
3.海南医学院理学院
关键词： CrPGP3;CrFAT1;莱茵衣藻;基因克隆;原核表达
期刊名称： 广东农业科学
ISSN： 1004-874X
年卷期： 2016 年 43 卷 08 期
页码： 163-168
摘要： 克隆莱茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)的CrPGP3和CrFAT1基因,并对其序列进行生物信息学分析和原核表达。选取莱茵衣藻CC124提取总RNA后,反转录c DNA,PCR获得CrPGP3和CrFAT1的全长编码区,构建原核表达载体CrPGP3-PGEX-6p-1和CrFAT1-PGEX-6p-1,转入大肠杆菌DL21(DE3)中,在37℃、1.0mmol/L IPTG诱导整合蛋白表达。结果表明,CrPGP3和CrFAT1的全长编码区分别为786 bp和1 188 bp,分别编码261和395个氨基酸;CrPGP3是与脂类合成相关磷脂酰甘油磷酸合成酶(Phosphatidylglycerophosphate synthase)属于CDP-alcohol phosphatidyltransferase家族,CrFAT1是酰基载体蛋白硫脂酶(Acyl-ACP thioesterase)属于hot dog家族;SDS-PAGE结果表明所表达蛋白与预期蛋白大小一致。本文成功克隆了CrPGP3和CrFAT1基因的全长编码区,并在原核生物中表达得到了预期蛋白。
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