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分子伴侣共表达对嗜热环糊精葡萄糖基转移酶异源可溶性表达的影响

文献类型： 中文期刊

作者： 郭永华 1 ; 陈济琛 2 ; 贾宪波 1 ; 林新坚 1 ;

作者机构： 1.福建农林大学生命科学学院

2.福建省农业科学院土壤肥料研究所

关键词： 嗜热环糊精葡萄糖基转移酶;可溶性表达;分子伴侣;共表达系统

期刊名称： 微生物学通报

ISSN： 0253-2654

年卷期： 2016 年 43 卷 03 期

页码： 518-526

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】通过优化表达条件,提高嗜热环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase)的可溶性表达和胞外酶活性。【方法】构建含cgt基因的重组表达质粒p ET-28a(+)-omp A-cgt,筛选最适诱导温度,并构建5种分子伴侣共表达系统(p KJE8、p KJE7、p Gro7、p Tf16和p G-Tf2,5种分子伴侣质粒分别与重组表达质粒p ET-28a(+)-omp A-cgt共表达),筛选最适分子伴侣质粒,优化共表达条件。【结果】通过SDS-PAGE分析和测定胞外酶活,CGTase基因在大肠杆菌中实现表达,且具有一定量的重组CGTase分泌至胞外;25°C诱导时CGTase的可溶性表达和在胞外上清中的酶活都最高;分子伴侣质粒p KJE8使酶的胞外活性提高了48.6%,效果最为显著;当L-阿拉伯糖浓度为0.5 g/L时,分子伴侣质粒p KJE8使酶的胞外活性提高了68.5%。【结论】通过优化表达条件及使用分子伴侣共表达系统提高了环糊精葡萄糖基转移酶的可溶性表达和胞外酶活,为该酶进一步相关研究奠定了基础。

  • 相关文献

[1]应用易错PCR技术提高环糊精葡萄糖基转移酶的可溶性表达. 郭永华,陈济琛,贾宪波,陈龙军,蔡海松,林新坚. 2016

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