文献类型： 中文期刊

作者： 李照耀 ¹ ; 李文良 ¹ ; 吴铖楠 ¹ ; 李基棕 ¹ ; 郝飞 ¹ ; 毛立 ¹ ; 周斌 ¹ ; 江杰元 ¹ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院兽医研究所农业部兽用生物制品工程技术重点实验室;南京农业大学动物医学院

关键词： Viperin基因;序列分析;真核表达;亚细胞定位;山羊

期刊名称： 中国兽医科学

ISSN： 1673-4696

年卷期： 2017 年 47 卷 11 期

页码： 1392-1398

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究分离山羊外周血单核细胞,设计引物,采用RT-PCR方法扩增出Viperin基因完整阅读框。经BLAST分析,该基因的核苷酸序列和推导的氨基酸序列与GenBank中已有序列的最高同源性均为99%。同时将不同物种(山羊、猪、人、小鼠)的氨基酸序列进行比对分析,发现N端结构域在不同物种间是高变区。然后,将目的基因酶切克隆入真核表达载体pc DNA3.1中构建重组表达质粒。经PCR、酶切和测序鉴定正确的阳性质粒分别被命名为pcDNA-g Vi HA和pcDNA-HAg Vi。使用脂质体Lipofectamine 2 000将重组质粒转染BHK21细胞,使用HA抗体进行间接免疫荧光检测,发现重组蛋白均得到表达,荧光分布于细胞质中;Western-blot结果表明,两个质粒转染后均可检测到分子量约为43 ku的条带。使用内质网标志物Calnexin抗体进行共聚焦检测,发现表达的Viperin蛋白与内质网存在共定位。上述研究结果为进一步研究山羊Viperin的抗病毒作用及其机制奠定了基础。