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番木瓜eIF4E和eIFiso4E酵母双杂交诱饵表达载体的构建及自激活检测

文献类型： 中文期刊

作者： 吴金燕 1 ; 言普 2 ; 沈文涛 2 ; 周鹏 1 ;

作者机构： 1.海南大学

2.中国热带农业科学院

关键词： 番木瓜;eIF4E;eIFiso4E;酵母双杂交;自激活检测

期刊名称： 热带生物学报

ISSN： 1674-7054

年卷期： 2010 年 1 卷 01 期

页码： 56-60

摘要： 通过RT-PCR获得番木瓜eIF4E和eIFiso4E基因的编码区,将其分别克隆到pBD-GAL4载体中,构建酵母双杂交系统的诱饵载体pBD-GAL4-eIF4E,pBD-GAL4-eIFiso4E。测序正确后,将重组质粒导入YRG-2酵母菌株,检测其表达产物对酵母细胞有无毒性及对报告基因有无激活作用。结果表明,获得了正确的番木瓜eIF4E,eIFiso4E基因编码区,并成功克隆到pBD-GAL4诱饵载体中,且转化有诱饵载体的YRG-2在SD/-Trp营养缺陷平板上生长良好,在SD/-His-Trp营养缺陷平板上不能生长,说明表达产物对酵母细胞无毒性,对报告基因也无自激活作用,这为下一步利用酵母双杂交系统检测番木瓜eIF4E,eIFiso4E蛋白与病毒的相互作用奠定了基础。

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