文献类型： 中文期刊

作者： 刘威 ¹ ; 袁芳艳 ² ; 周丹娜 ² ; 刘泽文 ² ; 杨克礼 ² ; 段正赢 ² ; 郭锐 ² ; 蔡行 ² ; 刘保亮 ² ; 吴修竹 ² ; 肖少波 ² ; 田永祥 ³ ;

作者机构： 1.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎与分子育种湖北省重点实验室;华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

2.;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎与分子育种湖北省重点实验室;华中农业大学农业微生物学国家重点实验室

3.;湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎与分子育种湖北省重点实验室;华中农业大学农业微生物学国家重点实验室;

关键词： 猪肺炎支原体;脂蛋白;密码子改造;二级结构

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2017 年 12 期

页码： 2275-2280

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 本研究旨在获得猪肺炎支原体脂蛋白LppB的表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究脂蛋白LppB的功能奠定基础。试验构建重组表达质粒pET30a-LppB,通过快速定点突变试剂盒将LppB基因中1 068,1 353,1 578nt处的A突变为G,使改造后的LppB基因能在大肠杆菌系统中正确表达,IPTG诱导重组蛋白的表达并进行蛋白纯化。SDS-PAGE分析结果显示,IPTG诱导表达后获得一条特异性蛋白条带,相对分子质量约为70 000,与预期蛋白大小一致。可溶性分析结果表明目的蛋白主要以可溶的形式表达于上清中;Western blot鉴定结果表明纯化的蛋白能与抗6×His标签的单抗发生特异性反应。采用DNAStar Protean模块对脂蛋白LppB进行了二级结构、蛋白质骨架柔性区域、抗原指数的预测,并确定了B细胞抗原优势表位的可能分布。