文献类型： 中文期刊
作者： 王建荣 1 ; 张曼夫 2 ;
作者机构： 1.上海市农业科学院畜牧兽医研究所
2.北京农业大学生物学院
关键词： 木霉;纤维二糖水解酶;基因文库;分子杂交;克隆
期刊名称： 真菌学报
ISSN： 1007-3515
年卷期： 1994 年 03 期
页码： 77-82
收录情况： 北大核心
摘要： 本文以噬菌体lambda EMBL3 DNA为载体,通过克隆绿色木酶(Trichoderma viride)高分子量基因组DNA的部分酶解片段,并将重组分子进行体外包装后侵染Escherichia.coli K802,由此构建了绿色木霉基因文库。以李氏木霉(Trichoderma reesei)纤维素酶CBHII基因的末端片段为探针,用轮迥噬菌斑原位杂交从文库中筛选出CBHII基因的阳性克隆5个,随机取其中3个克隆用上述探针作斑点杂交,结果进一步证明克隆了全长或近全长的绿色木霉CBHII基因,用李氏木霉CBHI基因的末端片段探针作斑点杂交,结果提示CBHI与CBHII基因的末端序列之间无同源性存在。从斑点杂交的阳性克隆中提取DNA,酶切鉴定插入片段的长度,并克隆于质粒pUC19,Southern杂交结果证明获得了含绿色木霉CBHII基因的重组质粒pCBHII-14。
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