文献类型： 中文期刊
作者： 王海燕 1 ; 陈新 1 ; 周新成 1 ; 沈旭 2 ; 孔华 1 ; 王文泉 3 ;
作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所
2.南京农业大学生命科学学院
3.海南大学热带作物学院
关键词： 丙酮酸磷酸双激酶;表达谱;RNA干扰;表达载体;木薯;遗传转化;脆性愈伤;转基因苗;PCR鉴定
期刊名称： 中国农学通报
ISSN： 1000-6850
年卷期： 2021 年 017 期
页码： 19-25
收录情况： CSCD
摘要： 本研究为了明确丙酮酸磷酸双激酶（ppdk）在木薯中的表达谱,创制Mechlppdk的干扰株系,以期为Mechlppdk的功能研究提供材料。本研究以栽培型木薯Arg7为材料,用qPCR的方法分析Mechlppdk在木薯根、茎、叶中的表达谱;采用RNA干扰的方法,构建Mechlppdk的干扰载体,并遗传转化木薯脆性愈伤,经木薯再生体系获得转基因苗,在添加抗生素的培养基上进行生根筛选,经PCR鉴定获得Mechlppdk的干扰株系。用qPCR的方法鉴定Mechlppdk在干扰株系的表达情况。结果表明,Mechlppdk在木薯叶片中表达量最高,达到管家基因的50%。在Mechlppdk的转运肽区,选取1个保守区段设计引物,构建RNA干扰表达载体pART27-Mechlppdki,将表达载体转化农杆菌LBA4404,侵染木薯脆性胚愈伤,获得阳性转基因木薯苗7个株系。通过qPCR分析发现各株系Mechlppdk转录本有不同程度的降低。通过以上分析表明本研究获得了干扰效率较高木薯Mechlppdk干扰株系,将为解析木薯Mechlppdk的功能提供研究材料。
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