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可转化人工染色体(TAC)文库载体DNA的制备

文献类型： 中文期刊

作者： 李晓玲 1 ; 李克秀 2 ; 赵洪锟 1 ; 赵茂林 3 ; 董英山 1 ;

作者机构： 1.吉林省农业科学院生物技术研究中心

2.长春工业大学化学与生命科学学院

3.中国科学院遗传与发育生物学研究所

关键词： 可转化人工染色体(TAC);文库载体;酶切;脱磷

期刊名称： 生物技术通报

ISSN： 1002-5464

年卷期： 2011 年 0 卷 09 期

页码： 199-204

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 对可转化人工染色体(TAC)pYLTAC747NH/sacB文库载体DNA的制备条件进行了较系统的摸索和研究。结果表明,该文库载体经碱裂解法提取、QIAGEN Plasmid Mini kit纯化后,可获得较纯净的载体DNA。对其闭环载体DNA分别用不同酶量的Hind III酶切处理,经琼脂糖凝胶电泳检测得出其最佳Hind III完全酶切条件为2 U Hind III/μg闭环载体DNA、37℃酶切30 min;分别用0.5 MBU和1 MBU HK脱磷酶/μg对其线性载体DNA进行脱磷处理,经电泳和载体自连产物电转化检测表明其适宜的完全脱磷条件为1 MBU HK脱磷酶/μg线性载体DNA,30℃脱磷1 h;将所制备的线性载体DNA与λDNA/Hind III酶切片段进行连接,连接产物转化频率较高,其电转化大肠杆菌DH10B感受态细胞频率可达到9.6×108。

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