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聚乙二醇(PEG)介导的甜瓜蔓枯病菌的转化(英文)

文献类型： 中文期刊

作者： 任海英 1 ; 李岗 2 ; 戚行江 2 ; 梁森苗 2 ; 郑锡良 2 ;

作者机构： 1.浙江省农业科学院园艺研究所

2.浙江省农业科学院园艺研究所;浙江省农业科学院农产品质量标准研究所,省部共建国家重点实验室培育基地浙江省植物有害生物防控重点实验室

关键词： 甜瓜蔓枯病菌;原生质体转化;聚乙二醇;转化效率;稳定性

期刊名称： 农业生物技术学报

ISSN： 1674-7968

年卷期： 2013 年 21 卷 08 期

页码： 965-973

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 蔓枯病是当前危害瓜类的主要病害,但是蔓枯病菌(Didymella bryoniae)病原学研究还非常落后,关于该菌功能基因的研究报道还较少。为了建立聚乙二醇(polyethylene glycol,PEG)介导的甜瓜蔓枯病菌原生质体遗传转化体系,本研究利用带有潮霉素B磷酸转移酶(hph)基因的质粒pSGate1为载体,通过PEG(分子量3350)介导的融合法转化蔓枯病菌株ZJDB32。将病菌分生孢子于PDB培养液(200g/L马铃薯煎汁,20g/L葡萄糖)内震荡培养20h,然后收集产生的幼嫩菌丝,在10mg/mL lysing enzyme+5mg/mL driselase酶液内28℃酶解3h,每克湿菌丝能产生3.8×107个原生质体。PEG介导融合转化pSGate1至D.bryoniae原生质体,每毫克ZJDB32的DNA转化效率最高能得到1230个转化子。结果表明,20个代表性的ZJDB32的转化子继代4次后其潮霉素抗性、生长速率、产孢量和致病性与野生型都没有明显变异,这些转化子可以进一步用于相关功能研究。因此,该转化体系的建立为甜瓜蔓枯病菌功能基因的深入研究提供了基础资料。

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