文献类型： 中文期刊
作者： 毕晓敏 1 ; 黄桂菊 1 ; 范嗣刚 1 ; 朱文杰 1 ; 喻达辉 1 ;
作者机构： 1.中国水产科学研究院南海水产研究所
关键词： 合浦珠母贝;Pearlin;原核表达;表达条件优化;包涵体
期刊名称： 南方水产科学
ISSN： 2095-0780
年卷期： 2015 年 11 卷 06 期
页码： 100-106
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 为了获得稳定高表达的合浦珠母贝(Pinctada fucata)壳基质蛋白Pearlin基因的重组融合蛋白,该研究从合浦珠母贝外套膜总RNA中扩增得到Pearlin的c DNA,将其ORF克隆至原核表达载体p ET32a构建得到重组质粒p ET32a-Pearlin,并转化表达宿主菌大肠杆菌(E.coli)BL21(DE3),得到的原核重组融合蛋白p ET32a-Pearlin约为34.19 k D。对重组融合蛋白表达所需IPTG诱导浓度、培养温度、培养基pH及IPTG诱导时间、时机进行了优化。结果显示,IPTG浓度在0.6~1.4 mmol·L~(-1)范围内诱导效果最佳;在IPTG终浓度为1 mmol·L~(-1)、相同培养时间(6 h)下,37℃表达蛋白最多;重组蛋白在p H分别为6.0、7.0、8.0的培养基中表达量变化不大;在IPTG诱导浓度一定的条件下,最佳诱导时间为4~6 h;在IPTG诱导浓度和诱导时间一定的条件下,在转接3~4 h后进行IPTG诱导蛋白表达量较理想。对重组融合蛋白p ET32a-Pearlin的可溶性进行检测,发现在不同的诱导条件下,融合蛋白都主要以包涵体形式存在。
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