文献类型： 中文期刊

作者： 闫家通 ¹ ; 陈冠玮 ¹ ; 缪青梅 ² ; 彭城 ² ; 杨蕾 ² ; 陈笑芸 ² ; 徐晓丽 ² ; 魏巍 ² ; 徐俊锋 ² ; 汪小福 ² ;

作者机构： 1.浙江师范大学生命科学学院

2.浙江省农业科学院

关键词： 转基因作物;RPA反应;荧光可视化;现场检测;快速提取

期刊名称： 遗传

ISSN： 0253-9772

年卷期： 2025 年 47 卷 006 期

页码： 694-707

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 随着我国转基因玉米和转基因大豆的商业化种植，为了保证我国生物育种产业的健康发展，迫切需要开发转基因玉米和大豆的现场快速检测技术。本研究针对转基因玉米和大豆现场快速检测技术的不足，提出了一种基于重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)的快速检测方法。选择具有代表性的转基因玉米(双抗12-5、DBN9936、MON810)和大豆(DBN9004、GTS40-3-2、SHZD32-1)为检测对象，根据其侧翼序列，筛选特异性引物和探针，建立了高特异性、灵敏度达20拷贝的RPA扩增体系。为了快速获取DNA，种子样品利用核酸释放剂获得可用于RPA扩增的模板，为了消除叶片中叶绿素并快速获取DNA，叶片样品利用本实验室研发的核酸快速一体化提取装置快速获取DNA，以消除叶绿素干扰。结合便携式金属浴启动RPA扩增，蓝光切胶仪用于可视化检测，构建了转基因玉米和大豆的现场快速检测方法。该方法检测时间约为20 min，与常规PCR检测结果一致，适用于现场快速检测，无需大型设备，具备较强的实用性和适应性。该方法为转基因作物现场检测提供了技术支持，并为其他核酸快速检测技术的应用提供参考。