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大白菜基因组DNA快速提取方法的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 王涛 1 ; 王超楠 1 ; 张红 1 ; 温娟娟 1 ; 张斌 1 ;

作者机构： 1.天津师范大学生命科学学院;天津科润蔬菜研究所蔬菜种质创新国家重点实验室天津市蔬菜遗传育种企业重点实验室

关键词： 大白菜;基因组DNA;快速提取

期刊名称： 华北农学报

ISSN： 1000-7091

年卷期： 2017 年 06 期

页码： 67-72

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 快速高效的DNA提取是作物大规模分子育种的关键一步。旨为构建一种快速提取大白菜基因组DNA的方法,以大白菜叶片为试验材料,比较了CTAB法、二步CTAB法以及4种碱裂解法提取DNA的质量,分析了不同方法提取的DNA为模板的PCR扩增效果,还对不同方法提取的基因组DNA的保存时间和保存条件进行了比较,选择最优的方法在抗根肿病基因分子标记辅助选择中进行了应用。结果表明,CTAB法和3种碱裂解法提取的基因组DNA作为模板的PCR扩增产物,都可以通过8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测到清晰的条带。其中碱裂解法Ⅲ,不仅提取质量好,而且提取过程简单、快速,能够满足大白菜高通量DNA提取的需要,提取的DNA在4℃和-20℃的条件下保存,将保存至30 d的基因组DNA作为模板进行PCR扩增,产物仍然可以通过聚丙烯酰胺凝胶电泳检测到清晰的条带,说明这种方法保存时间较长,经验证,该方法在抗根肿病基因分子标记辅助选择中的应用效果也较好。碱裂解法Ⅲ显著提高了大白菜分子标记辅助筛选的效率,可广泛应用于大白菜分子标记辅助选择育种。

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