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微流控线性加载低温保护剂减少猪MⅡ期卵母细胞的渗透损伤

文献类型: 中文期刊

作者: 杨云 1 ; 周新丽 2 ; 戴建军 3 ; 张德福 4 ; 邵文琪 1 ;

作者机构: 1.上海理工大学生物热科学研究所

2.浙江大学制冷与低温研究所

3.上海农业遗传育种重点实验室动物遗传工程研究室

4.上海市农业科学院畜牧兽医研究所

关键词: 卵母细胞;微流体;渗透损伤;冷冻保护剂;低温保存

期刊名称: 生物化学与生物物理进展

ISSN: 1000-3282

年卷期: 2016 年 43 卷 06 期

页码: 616-623

收录情况: SCI ; 北大核心 ; CSCD

摘要: 在卵母细胞低温保存中,通常需要加载冷冻保护剂来抑制冰晶对细胞的损伤,但高浓度冷冻保护剂的加载会对细胞造成渗透损伤.为了减小细胞的渗透损伤,本文设计并制作了适合卵母细胞冷冻保护剂加载的微流体装置,研究了微流控线性加载30%(v/v)二甲基亚砜(Me2SO)低温保护剂时细胞内保护剂浓度变化、细胞体积变化,以及对细胞存活率与发育率的影响,并与传统的加载方法(一步法、分步法)做了比较.结果表明:微流控法能够实现卵母细胞冷冻保护剂的连续线性加载,避免了卵母细胞体积的骤变,显著减小了细胞的渗透损伤,提高了细胞的存活率.其中细胞的最小渗透体积减小为0.86V0,细胞的存活率达到92.8%,比一步法高33%,比两步法高16.3%,但与四步法之间无显著性差异.经孤雌激活后体外培养,细胞的卵裂率和囊胚率分别达到75.8%和27.4%,都显著高于一步法和分步法(P<0.05).因此,微流控线性加载低温保护剂能够显著减小细胞的渗透损伤,为卵母细胞低温保存技术提供新思路.

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