文献类型： 中文期刊

作者： 巩元勇 ¹ ; 倪万潮 ¹ ; 帕尔哈提·买买提 ² ; 郭书巧 ¹ ; 束红梅 ¹ ; 何林池 ³ ;

作者机构： 1.江苏省农业科学院经济作物研究所/农业部长江下游棉花和油菜重点实验室

2.国家棉花工程技术研究中心

3.江苏沿江地区农业科学研究所

关键词： 棉花;GhEPSPS基因;原核表达;SDS-PAGE

期刊名称： 棉花学报

ISSN： 1002-7807

年卷期： 2014 年 26 卷 06 期

页码： 563-568

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 目的在于构建棉花GhEPSPS基因的原核表达载体,并在宿主大肠杆菌中成功诱导表达。利用RT-PCR技术从陆地棉苏棉18中克隆获得GhEPSPS基因的开放阅读框序列,连接到p EASY-Blunt平端载体,构建获得重组载体p EASY-Blunt-GhEPSPS;以该重组载体为模板,PCR获得两端含有Eco RⅠ和XhoⅠ酶切位点的GhEPSPS基因CDS序列,通过这2个酶切位点插入到p ET32a载体,构建获得原核表达重组载体p ET32a-GhEPSPS,转化到宿主菌株BL21(DE3)中,经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测目的基因的表达情况。研究结果表明,成功克隆获得了棉花GhEPSPS基因的CDS序列,并成功构建了该基因的原核表达载体,目的基因能够在宿主菌中被诱导大量表达。该研究结果将为深入研究棉花EPSPS酶的结构、功能以及酶学特性提供重要的研究基础。