文献类型： 中文期刊

作者： 赵振兴 ¹ ; 范奇璇 ¹ ; 王思元 ¹ ; 董铮 ¹ ; 胡中泽 ² ; 张永江 ¹ ;

作者机构： 1.中国检验检疫科学研究院

2.江苏省农业科学院泰州农科所

关键词： 辣椒轻斑驳病毒;RT-RAA;CRISPR/Cas12a;可视化检测

期刊名称： 河南农业科学

ISSN： 1004-3268

年卷期： 2024 年 53 卷 009 期

页码： 80-87

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 辣椒是重要的园艺作物，辣椒轻斑驳病毒（Pepper mild mottle virus,PMMoV）严重威胁辣椒等茄科园艺作物的生产安全。为提高PMMoV的防控效率，根据其编码外壳蛋白（Coat protein,CP）的基因保守序列，基于重组酶介导等温核酸扩增技术（Recombinase?aided amplification,RAA），设计了特异性RAA引物，实现对PMMoV的快速等温扩增，并基于CRISPR/Cas12a的设计原则，设计了crRNA靶向RT-RAA扩增产物。优化结果显示，总反应体系在报告基因FQ终浓度为400 nmol/L,Cas12a/crRNA比例为1∶5、终浓度为200 nmol/L和1 000 nmol/L条件下检测信号最强，最终的RT-RAA反应和CRISPR显色体系分别仅需15 min，即可在便携式蓝光照射设备下直接观察到阳性信号。该方法可特异性检测PMMoV，对携带PMMoV的辣椒样品RNA的检测极限可达到1.34 pg/μL，分别是普通RT-PCR和实时荧光RT-PCR检测灵敏度的1 000倍和10倍。对实际样品中的检测结果显示，建立的RT-RAA-CRISPR/Cas12a检测技术可以在PMMoV侵染的辣椒和番茄叶片、果实及土壤中检测到PMMoV，可用于辣椒轻斑驳病毒的快速、灵敏、可视化检测。