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香蕉内生拮抗细菌KKWB-5的几丁质酶在大肠杆菌中的表达纯化与复性研究

文献类型： 中文期刊

作者： 夏启玉 1 ; 顾文亮 2 ; 卢娟 3 ; 张欣 4 ; 卢雪花 1 ; 王宇光 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

2.中国热带农业科学院香料饮料研究所

3.广西壮族自治区玉林市林业科学研究所

4.中国热带农业科学院环境与植物保护研究所

关键词： 拮抗细菌;几丁质酶;表达纯化;复性;活性分析

期刊名称： 中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2013 年 29 卷 33 期

页码： 307-312

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 将香蕉内生拮抗细菌KKWB-5的几丁质酶在大肠杆菌中的表达,旨在检测该酶对香蕉枯萎病病原菌4号小种的抗性。PCR扩增该基因连入大肠杆菌表达载体pET22b,导入大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组菌株,SDS-PAGE分析目的蛋白的表达,对目的蛋白进行纯化,并将纯化后的目的蛋白复性,对复性产物进行水解几丁质活性和拮抗香蕉枯萎病活性的分析。SDS-PAGE分析表明目的蛋白在大肠杆菌中以包涵体的形式大量表达,经变性Ni2+柱纯化得到了高纯度的重组蛋白,表达量达293 mg/L;稀释和透析2种复性方法中,透析复性法的目的蛋白得率较高,为84.6%。复性后的目的蛋白具有水解几丁质的活性,同时对香蕉枯萎病病原菌也具有一定的抗性,但抗性较弱。该几丁质酶在大肠杆菌中得到高效表达,且复性后的几丁质酶对香蕉枯萎病病原菌4号小种有一定的抑制作用,该酶对KKWB-5菌株拮抗香蕉枯萎病菌的能力有一定的贡献。

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