您好，欢迎访问上海市农业科学院 机构知识库！
上海市农业科学院机构知识库

全部

  • 全部
  • 标题
  • 学者
  • 机构
  • 关键词

高效、新T-DNA侧翼序列分离技术——Actail-PCR

文献类型： 中文期刊

作者： 杨立勇 1 ; 刘灶长 1 ; 周立国 2 ; 罗华程 2 ; 罗利军 1 ;

作者机构： 1.上海市农业生物基因中心/作物遗传改良国家重点实验室种质资源分室

2.华中农业大学

关键词： T-DNA;侧翼序列;TAIL-PCR;Actail-PCR

期刊名称： 中国农业科学

ISSN： 0578-1752

年卷期： 2009 年 42 卷 04 期

页码： 1447-1451

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 【目的】建立一种有效分离T-DNA插入突变体侧翼基因组序列的方法。【方法】分离侧翼的目标基因组序列是利用T-DNA标签法研究植物功能基因组学的一个关键步骤,笔者发展稳定高效的Actail-PCR分离技术。该技术一侧引物来自于T-DNA载体,另一侧引物为一个复性控制引物。复性控制引物在3'端为一个14bp的随机简并引物,在5'端非目标尾部序列接上一个通用引物,中间由5个多聚脱氧次黄嘌呤核苷(poly(dI))连接。【结果】Actail-PCR技术将随机简并引物重新编辑成复性控制引物,在40℃的低严谨条件下,3'端的随机简并引物可以与T-DNA插入突变体的侧翼目标区段随机的结合,扩增得到目标片段,随后利用5'端的通用引物与T-DNA载体上的巢式引物依次组合,在65℃(10个循环后逐步降温至58℃)的高严谨条件下逐步扩增特异片段,同时抑制非特异性扩增,可以显著提高目标片段的扩增效率,减少假阳性。【结论】相对传统的TAIL-PCR,Actail-PCR技术可以更高效地分离T-DNA插入突变体的侧翼基因组序列。

  • 相关文献

[1]Event specific qualitative and quantitative polymerase chain reaction detection of genetically modified MON863 maize based on the 5 '-transgene integration sequence. Xu, SC,Pan, AH,Yin, CS,Zhang, KW,Wang, ZY,Zhou, ZG,Zhang, DB. 2005

[2]Event-specific qualitative and quantitative PCR detection of the GMO carnation (Dianthus caryophyllus) variety Moonlite based upon the 5 '-transgene integration sequence. Li, P.,Jia, J. W.,Jiang, L. X.,Zhu, H.,Bai, L.,Wang, J. B.,Tang, X. M.,Pan, A. H.. 2012

[3]Event-Specific Qualitative and Quantitative Polymerase Chain Reaction Analysis for Genetically Modified Canola T45. Yang, Litao,Pan, Aihu,Zhang, Haibo,Guo, Jinchao,Yin, Changsong,Zhang, Dabing.

[4]Overexpression of ACL1 (abaxially curled leaf 1) Increased Bulliform Cells and Induced Abaxial Curling of Leaf Blades in Rice. Li, Ling,Shi, Zhen-Ying,Li, Lin,An, Lin-Sheng,Zhang, Jing-Liu,Li, Ling,Shen, Ge-Zhi,Wang, Xin-Qi. 2010

作者其他论文 更多>>
置顶
购物车
反馈

© 京ICP备09089781号-29 主办单位：上海市农业科学院

学术资源： 中国农业科学院 农业专业知识服务系统 农科联盟资源共建共享平台 中国农业科技文献与信息服务平台 中国农业期刊集成服务平台