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大菱鲆(Scophthalmus maximus)蛋白质二硫键异构酶SmPDIA3的表达分析和功能验证

文献类型: 中文期刊

作者: 唐启政 1 ; 孙志宾 1 ; 王新安 1 ; 马爱军 1 ; 杨双双 1 ; 黄智慧 1 ;

作者机构: 1.中国水产科学研究院黄海水产研究所山东省海洋渔业生物技术与遗传育种重点实验室青岛市海水鱼类种子工程与生物技术重点实验室;上海海洋大学水产与生命学院;青岛海洋科学与技术国家实验室海洋生物学与生物技术功能实验室

关键词: 大菱鲆;RACE;SmPDIA3;原核表达;分子伴侣

期刊名称: 海洋与湖沼

ISSN: 0029-814X

年卷期: 2019 年 02 期

页码: 409-419

收录情况: 北大核心 ; CSCD

摘要: 本研究利用SMART-RACE技术克隆了大菱鲆SmPDIA3基因。SmPDIA3基因cDNA序列全长2083bp,包括1479bp的开放阅读框,编码492个氨基酸, GenBank登录号:MG765516。组织表达分析发现:SmPDIA3基因在肠、鳃、肝脏等组织中均有表达,其中在肝脏中表达量最高,脑中最低。进一步研究了温度胁迫后SmPDIA3基因在肠和肝脏组织中的表达变化规律,发现随着胁迫温度的升高,SmPDIA3基因的相对表达量总体上升,并在28°C时达到最大。利用原核表达技术,构建了pET-28a-PDIA3原核表达载体,IPTG诱导后融合蛋白主要在上清中表达。将上清中的蛋白分离纯化后,利用Westernblot技术验证了目的蛋白的准确性。将纯化后的目的蛋白浓缩后,利用BCA蛋白浓度测定试剂盒测得蛋白浓度为243.18μg/mL。最后设计变性溶菌酶的复性实验,验证了SmPDIA3蛋白具有分子伴侣功能,能够辅助变性蛋白的正确折叠。

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