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SDS法提取石斛基因组DNA的研究

文献类型： 中文期刊

作者： 李静 1 ; 尹俊梅 2 ; 任羽 2 ; 杨光穗 2 ;

作者机构： 1.海南大学农学院

2.中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所/农业部热带作物种质资源利用重点开放实验室

关键词： 石斛;基因组DNA;提取方法

期刊名称： 热带农业科学

ISSN： 1009-2196

年卷期： 2009 年 29 卷 12 期

页码： 22-26

摘要： 以密花石斛(Dendrobium densiflorum Lindley ex Wallich)为研究试材,对植物SDS方法提取基因组DNA中的若干影响因子诸如药品、试剂配制方法、DNA取材部位、蛋白质去除次数、DNA析出时间、提取样品水浴时间等进行了比较分析。结果表明:不同的SDS缓冲液配制方法提取效果差异较大,Wang's配方产率及纯度都较高;石斛花苞的DNA提取产率较叶片高,但纯度较叶片低;提取过程中,适宜的水浴时间当为30～40min,过短DNA产率下降,过长会引起DNA的降解,或最后产物中增加其他杂质;氯仿/异戊醇抽提次当为2～3次,对去除DNA中蛋白质、多糖及其它杂质有一定的作用,过多则DNA损失也明显;异丙醇沉淀时间10min时核酸析出量在80%以上,纯度相对较高,继续沉淀的产物中DNA含量及纯度明显变低,同时采取挑取絮状沉淀或再用无水乙醇纯化10min的方法,可减少蛋白质、多糖等其它杂质的影响。

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