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花椰菜的ISSR-PCR反应体系的建立与优化

文献类型： 中文期刊

作者： 陶兴林 1 ; 胡立敏 1 ; 朱慧霞 1 ; 侯栋 1 ; 张东琴 1 ;

作者机构： 1.甘肃省农业科学院蔬菜研究所

关键词： 花椰菜;ISSR反应体系;优化

期刊名称： 中国农学通报

ISSN： 1000-6850

年卷期： 2010 年 26 卷 03 期

页码： 27-31

收录情况： 北大核心

摘要： 以花椰菜基因组为材料,通过单因素试验,对ISSR-PCR反应体系中各种影响因子如dNTPs浓度,DNA模板含量,Taq DNA聚合酶量,引物用量以及最适退火温度等进行了优化和筛选,建立了适合花椰菜的ISSR-PCR反应体系:25μL反应体积:内含10×PCR反应缓冲液(含Mg~(2+))2.5μL、0.5U TaqDNA聚合酶、0.2mmol/L dNTPs、0.5μmol/L引物、60ng模板DNA。确定了适宜的退火温度为48.6℃。扩增程序为94℃预变性5 min;然后94℃变性30s,46.9℃退火45 s,65℃延伸1.5min,35个循环;最后65℃延伸7min,4℃保存。用120条引物对花椰菜基因组进行标记,筛选出引物TI-13可以将这6份花椰菜材料区分开。花椰菜ISSR反应体系的建立为利用ISSR标记技术进行花椰菜品种鉴别、分类、种质资源遗传多样性分析奠定了良好基础。

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