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利用ID-ELISA技术调查分析海南3种主要番木瓜病毒分布及感病情况

文献类型： 中文期刊

作者： 杨勇 1 ; 庹德财 1 ; 沈文涛 1 ; 言普 1 ; 黎小瑛 1 ;

作者机构： 1.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

关键词： 番木瓜病毒;外壳蛋白;抗血清;ID-ELISA

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2015 年 36 卷 10 期

页码： 1866-1872

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 利用PCR方法分别扩增番木瓜环斑病毒(papaya ringspot virus,PRSV)、番木瓜畸形花叶病毒(papaya leaf distortion mosaic virus,PLDMV)和番木瓜花叶病(papaya mosaic virus,Pa MV)的外壳蛋白(coat protein,CP)基因,并连接到原核表达载体p ET-28a上,获得重组质粒p ET28-PRSV-CP、p ET28-PLDMV-CP和p ET28-Pa MV-CP,通过转化、诱导表达后,经SDS-PAGE分析显示,这3种CP蛋白在大肠杆菌中高效表达,其中PRSV CP蛋白和PLDMV CP以包涵体形式存在,Pa MV CP以可溶蛋白形式存在。利用Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化获得了3种病毒的重组CP蛋白,并免疫大白兔获得高效价的抗体。Western blot检测结果表明,这3种抗血清与对应的诱导表达蛋白发生特异反应。再采用抗血清建立一种快捷、简便和低成本的ID-ELISA(Indirect enzymelinked immunosorbent assay)技术,并利用此技术对海南岛283个疑似感病的番木瓜样品进行检测鉴别,初步掌握了海南岛3种主要番木瓜病毒的分布及感病情况,为下一步该病的有效防治策略提供科学依据。

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