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柑桔钙离子结合蛋白基因克隆及植物表达载体构建

文献类型： 中文期刊

作者： 贝学军 1 ; 钟广炎 2 ;

作者机构： 1.西南大学园艺园林学院

2.广东省农业科学院果树研究所

关键词： 柑桔;钙离子结合蛋白基因;基因克隆;遗传转化

期刊名称： 中国南方果树

ISSN： 1007-1431

年卷期： 2012 年 41 卷 03 期

页码： 11-16

收录情况： 北大核心

摘要： 以伏令夏橙叶片中分离的总RNA为模板,经RT-PCR扩增到一条约600bp、含钙离子结合蛋白基因(CsCaBP)的片段,将此片段克隆到pMD-19T中,经测序分析该片段与甜橙基因组中的对应序列完全吻合。设计2对带有限制性内切酶位点的特异性引物,以cDNA为模板扩增到2个CsCaBP片段,并连接到TA克隆载体pMD-19T上;经双酶切消化后,分别以正反2个方向插入到植物表达载体pFGC5941的查耳酮合成酶(CHSA)内含子两侧,构建成功CsCaBP的RNA干扰载体,但未获得转基因植株。将CsCaBP的正向片段定向克隆到具有CaMV35S启动子的pF-GC5941表达质粒上,构建成功CsCaBP过量表达载体。将构建好的表达载体导入根癌农杆菌LBA4404菌株,转化酸橙下胚轴,经PCR检测,获得9株过量表达转基因植株,荧光定量PCR验证发现目的基因在转基因植株中有不同程度的表达。

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