文献类型： 中文期刊

作者： 王丽 ¹ ; 贺江 ² ; 王耘 ² ; 雷兆静 ² ; 屠康 ³ ; 刘贤进 ² ;

作者机构： 1.安徽科技学院

2.江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所农业部食品质量安全监控重点开放实验室

3.南京农业大学食品科技院

关键词： 适体;SELEX;双链DNA;单链DNA

期刊名称： 江苏农业学报

ISSN： 1000-4440

年卷期： 2011 年 27 卷 05 期

页码： 1133-1136

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 探讨建立适体SELEX筛选中单链DNA(ssDNA)的制备方法,生成适体筛选的次级库,为适体SELEX筛选奠定基础。将PCR扩增后带生物素标记的双链DNA(dsDNA)连接在链霉亲和素标记的凝胶上,用NaOH变性解链制备ssDNA。利用荧光法分析dsDNA与凝胶结合所需的时间及NaOH对生物素与链霉亲和素标记凝胶结合的影响,在优化的试验条件下制备ssDNA,用琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳对其产物进行鉴定。结果显示:生物素标记的dsDNA与链霉亲和素标记的凝胶结合的时间以40 min为佳,0.01 mol/L、0.10 mol/L和1.00 mol/L的NaOH均不影响生物素与链霉亲和素标记凝胶的结合;在优化试验条件下制备的产物为ssDNA。表明采用上述方法制备ssDNA,操作简单、方便,所需时间短,适用于适体SELEX筛选中次级库的生成。