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牛病毒性腹泻病毒基因组cDNA文库的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 糜克永 1 ; 王蔷 1 ; 朱勇 1 ; 任向远 1 ; 杨玉莹 1 ;

作者机构： 1.中国科学院武汉病毒研究所，内蒙古畜牧科学院

关键词： 牛病毒性腹泻病毒，逆转录，基因克隆，cDNA文库

期刊名称： 中国病毒学

ISSN： 10035125

年卷期： 1995 年 02 期

页码：

收录情况： 北大核心

摘要： 以牛病毒性腹泻病毒（ＢＶＤＶ）ＩｎＬ株的基因组ＲＮＡ为模板，经逆向转录酶作用，合成第一链ｃＤＮＡ，再以ＲＮａｓｅ／Ｈ与ＤＮＡ聚合酶Ｉ联合作用合成ｄｓｃＤＮＡ，并以ｄＣ同聚物尾化。ｐＵＣ８ＤＮＡ在ＰｓｔＩ酶解后，以ｄＧ同聚物尾化，两者退火构成重组质粒，转化到Ｅ．ｏｏｌｉＪＭ１０１受体菌中。另以γ－￣（３２）Ｐ－ＡＴＰ标记ＢＶＤＶＲＮＡ制备探针，通过菌落原位杂交筛选重组子。酶切分析表明重组质粒插入片段最长接近１２ｋｂ。该片段含有ＥｃｏＲⅠ，ＨｉｎｄⅢ、ＢａｍＨⅠ的酶切位点，此ｃＤＮＡ文库基本上包括了ＢＶＤＶ基因组。

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