文献类型： 中文期刊

作者： 魏文焯 ¹ ; 郑超 ¹ ; 吴艳 ¹ ; 梁振华 ¹ ; 皮劲松 ¹ ; 杜金平 ¹ ; 李成凤 ² ; 张昊 ¹ ;

作者机构： 1.湖北省农业科学院畜牧兽医研究所动物胚胎工程及分子育种湖北省重点实验室

2.湖北神丹健康食品有限公司

关键词： 环状RNA;蛋鸭;circ-ZNF326;核质分布;过表达载体

期刊名称： 中国畜牧兽医

ISSN： 1671-7236

年卷期： 2022 年 003 期

页码： 837-844

收录情况： 北大核心

摘要： 【目的】明确circ-ZNF326的基本特征及对蛋鸭小肠上皮细胞增殖的影响。【方法】以绿头鸭为研究对象，采集鸭胚肠道并培养小肠上皮细胞，提取RNA并反转录为cDNA，参考circ-ZNF326的全长序列设计引物，通过PCR反应扩增获得circ-ZNF326的部分序列，测序后利用反向剪接位点验证其成环方式。利用PARISTM Kit提取细胞核与细胞质RNA检测其在细胞中的核质分布情况。合成circ-ZNF326全长序列并利用双酶切及T4连接酶将circ-ZNF326全长序列连接在PLCDH-ciR真核表达载体上，转化大肠杆菌DH5α感受态细胞扩大培养，提取重组质粒进行双酶切及琼脂糖凝胶电泳检测，将circ-ZNF326过表达载体转染小肠上皮细胞，利用实时荧光定量PCR技术检测circ-ZNF326过表达后的表达效率，利用CCK-8检测过表达circ-ZNF326对蛋鸭小肠上皮细胞增殖的影响。【结果】circ-ZNF326是由ZNF326基因第10、11和12号外显子反向剪接而成，且主要分布在细胞质中。circ-ZNF326过表达载体构建成功，表达效率极显著高于空载组（P<0.01）。将circ-ZNF326过表达载体转染小肠上皮细胞，结果发现，circ-ZNF326过载组在24～72h细胞活力极显著或显著高于空载组（P<0.01;P<0.05）。【结论】本试验成功验证了circ-ZNF326的反向剪接与环状结构，证明了circ-ZNF326主要富集在细胞质中，并构建了circ-ZNF326过表达载体，证实了过表达circ-ZNF326可提高蛋鸭小肠上皮细胞的活力，为深入研究circ-ZNF326的生物学功能及其对蛋鸭小肠上皮细胞增殖的调控机制奠定了理论基础。