文献类型： 中文期刊

作者： 彭日荷 ¹ ; 熊爱生 ¹ ; 李贤 ¹ ; 范惠琴 ¹ ; 姚泉洪 ¹ ; 郭美锦 ² ; 张嗣良 ² ;

作者机构： 1.上海市农业科学院生物技术研究中心、上海市农业遗传育种重点实验室

2.华东理工大学生物工程学院

关键词： 热稳定植酸酶;基因合成;高效表达;毕氏酵母

期刊名称： 生物化学与生物物理学报

ISSN： 0582-9879

年卷期： 2002 年 06 期

页码： 47-52

收录情况： SCI ; 北大核心 ; CSCD

摘要： 自然界很难获得大量的耐高温植酸酶。采取连续延伸PCR方法 ,按照毕氏酵母的偏爱密码 ,合成 1.3kb烟熏曲霉耐高温植酸酶基因 fphy。合成基因与野生型基因核苷酸序列同源性为 74 % ,但编码的氨基酸序列一致。将耐高温植酸酶基因fphy插入毕氏酵母高效表达载体 pPIC9中 ,与分泌信号肽序列融合 ,通过同源重组将耐高温植酸酶基因整合到酵母染色体中 ,通过SDS PAGE检测和表达产物的酶活性筛选 ,得到重组转化子 ,证明植酸酶获得有效分泌和高效表达。经过 5L小罐高密度发酵 ,蛋白质表达量为 5 .6 g/L ;每毫升发酵液中植酸酶的活力单位达 130 0 0 0u ;表达产物耐高温性很强 ,90℃处理 80min后仍有 4 0 %的活性。