文献类型： 中文期刊
作者： 吕自力 1 ; 王亮 2 ; 刘婷婷 3 ; 石国庆 4 ;
作者机构： 1.石河子大学动物科技学院
2.中国科学院新疆理化技术研究所
3.新疆金牛生物有限公司
4.新疆农垦科学院畜牧兽医所
关键词： 牛;输卵管上皮细胞;电穿孔;胶原蛋白;转基因;克隆
期刊名称： 中国兽医学报
ISSN： 1005-4545
年卷期： 2012 年 32 卷 01 期
页码： 144-150
收录情况： 北大核心 ; CSCD
摘要： 以2岁奶牛输卵管为材料,用胰酶消化法分离得到了牛输卵管上皮细胞。输卵管上皮细胞在DMEM/F12培养基中生长良好。用一代牛输卵管上皮细胞为靶细胞,对其进行了电穿孔转染,转染对象是分子大小为31 085bp的以β-casein启动子为基础的含有人胶原蛋白cDNA基因和EGFP、Neor双标记基因的质粒。电穿孔试验发现,牛输卵管上皮细胞在低渗缓冲液中电转染可以获得阳性转染子,其中以90mOsm/kg为最佳。电压以800V为好,电压高和低都不利于电穿孔的成功。成功转染的细胞用800mg/L G418进行筛选,在10d后获得了较大的阳性细胞克隆簇。对获得的阳性细胞克隆簇进行扩大后,得到了较纯的阳性细胞克隆系,流式细胞仪检测其纯度为81.6%。在荧光显微镜下选择阳性细胞作为核移植供体细胞进行了转基因克隆试验,结果显示以转基因和非转基因细胞为核供体获得的重构胚融合率差异显著(51.9%比63.2%),获得的桑椹胚/囊胚率差异不显著(20.3%比25.5%)。对获得的具有绿色荧光的胚胎进行DNA分析,结果显示这些胚胎成功转入了外源基因,并且转入的外源基因结构完整。
- 相关文献
[1]牛输卵管上皮细胞的纯化培养与生长特性研究. 吕自力,石国庆,王亮. 2011
[2]牛卵丘细胞的生长特征与转基因. 吕自力,王亮,石国庆. 2011
[3]质粒纯化及动物骨骼肌电穿孔转基因的研究. 皮文辉,巩霞,孟庆勇,宋志强,姬勇,刘守仁. 2008
[4]新疆部分地区牛新孢子虫病的血清学调查. 徐雪平,陈志蓉,薄新文,Dieter Palmer. 2002
[5]牛IFN-α、IFN-β及IFN-γ mRNA实时SYBR GreenⅠ定量RT-PCR检测方法的建立及应用. 韩猛立,杨井泉,姚守秀,黄新,薄新文,钟发刚. 2010
[6]牛附睾和附睾液分析与牛附睾尾精子在模拟附睾液中存活试验. 倪建宏,刘长彬,张宾,Graham W Kay. 2011
[7]牛Th1/Th2型细胞因子实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立及应用. 韩猛立,蔡日鹏,黄新,何延华,薄新文. 2011
[8]牛Toll样受体实时荧光定量PCR检测方法的建立. 韩猛立,黄新,何延华,宋天增,薄新文,钟发刚. 2011
[9]牛共刺激分子CD80和CD86实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立与应用. 韩猛立,何延华,黄新,宋天增,薄新文,钟发刚. 2010
[10]新疆小海子垦区牛梨形虫感染情况的调查. 张峰,王正荣,蒋建军,薄新文,张艳艳,贾春英. 2021
[11]一例牛布鲁氏菌病的实验室诊断与防治建议. 李维蓬,王正荣,张艳艳,孙艳,薄新文. 2023
[12]牛病素性腹泻病毒在绵羊垂直感染中的抗原分布. 钟发刚,田晶华. 2002
[13]一八一团牛羊布鲁氏菌病血清流行病学调查与分析. 曲明悦,韩猛立,蒲新竹,李玉梅,剡根强. 2014
[14]应用AML基因进行牛性别鉴定的研究. 陈晓军,罗淑萍,吴阳升,徐雪萍,王新华. 2005
[15]牛羊布鲁氏菌病血清流行病学调查. 刘艳婷,黄新,蔡国宝,韩猛立. 2017
[16]牛巴贝斯虫病诊断技术研究进展. 张峰,王正荣,蒋建军,薄新文,张艳艳. 2021
[17]牛IRF7蛋白的原核表达及多克隆抗体的制备. 张江伟,张超,何金科,席静,孙天浩,何延华,陈创夫. 2021
[18]牛羊鹿饲料舔食砖的研究与应用. 杨玉福,宋志强,代蓉,蒋勇,刘福元,任自成,姜新生,文键,刘振国,杨永军,汤孝禄,陈万福,刘洪旗. 2001
[19]脂肪因子Chemerin对牛卵巢颗粒细胞凋亡与自噬的影响. 段银平,薛瑛,周爽,张敏,张宾,李惠侠. 2019
[20]库车市牛场十二指肠贾第虫和隐孢子虫的分子检测与鉴定. 徐春艳,张宽宽,王正荣,黄忠武,井波,张艳艳,余复昌,齐萌. 2022
作者其他论文 更多>>
-
誉宇502花生在南疆阿拉尔地区种植表现及配套栽培技术
作者：焦灰敏;桑玉伟;何宗铃;水涌;王志军;张国丽;马盼盼;王桥江;王亮
关键词：花生品种;誉宇502;阿拉尔地区;产量;高产栽培技术
-
肉用绵羊高效繁育技术研究
作者：刘昱成;王晶晶;杨杨;王福泉;万鹏程;石国庆
关键词：绵羊;生产现状;改良措施;胚胎移植;高效繁育
-
新疆细毛羊养殖现状及遗传资源保护利用措施
作者：刘昱成;王晶晶;石国庆;万鹏程
关键词：细毛羊;遗传资源;产业
-
阿拉尔市花生种植现状及发展建议
作者：焦灰敏;桑玉伟;何宗铃;水涌;王志军;马盼盼;张国丽;王桥江;王亮
关键词：阿拉尔市;花生;种植现状;问题;发展建议
-
新疆辣椒产业发展优势分析及发展建议
作者：焦灰敏;桑玉伟;何宗铃;水涌;朱金成;王亮
关键词：新疆;加工辣椒;发展优势;产业分析;展望
-
半胱胺对羔羊卵母细胞体外成熟及胚胎发育的影响
作者：汪保;王晶晶;刘昱成;张振良;倪建宏;刘长彬;傅祥伟;石国庆;万鹏程;崔炳灿
关键词：半胱胺;体外成熟;羔羊卵母细胞
-
生物角蛋白及其生物医学应用的研究进展
作者：管峰;胡馨予;姚逸安;石国庆;刘守仁;万鹏程
关键词：角蛋白;来源;提取技术;应用
