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转基因大豆插入位点分析及特异性PCR检测方法的建立

文献类型： 中文期刊

作者： 郭娜娜 1 ; 吴辉 1 ; 于晓惠 2 ; 黄惜 1 ; 陈银华 1 ; 彭明 2 ;

作者机构： 1.海南大学农学院

2.中国热带农业科学院热带生物技术研究所

关键词： 转基因大豆;LEC1基因;事件特异性检测;TAIL-PCR

期刊名称： 热带作物学报

ISSN： 1000-2561

年卷期： 2011 年 32 卷 08 期

页码： 1527-1531

收录情况： CSCD

摘要： 采用TAIL-PCR方法研究转基因大豆外源基因LEC1插入位点序列特征,并根据此特征建立了LEC1转化事件特异性检测方法。依据正义表达载体上T-DNA区段侧翼序列设计特异性引物和简并引物,获得4个同源序列。对获得的序列进行Blastn分析发现,p69、p148、p225均为载体T-DNA区段一部分,未见大豆基因组序列;P217插入片段的序列分析表明,该序列长863 bp,其中T-DNA左边界序列长143 bp,720 bp为大豆基因组片段,与大豆光系统II类囊体膜蛋白(Thylakoid membrane proteins)的206-926区段同源性为99%,这表明,外源DNA插入了大豆基因组中类囊体膜蛋白编码区的206位。根据分离的序列建立事件特异性定性检测方法,扩增片段大小为277 bp。该事件特异性检测方法具有高度的特异性和良好的灵敏性,为转基因大豆品种LEC1的身份识别提供了有效的方法。

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