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利用常规PCR和实时荧光定量PCR检测杨梅凋萎病菌

文献类型： 中文期刊

作者： 任海英 1 ; 戚行江 1 ; 梁森苗 1 ; 郑锡良 1 ;

作者机构： 1.浙江省农业科学院园艺研究所

关键词： 杨梅;凋萎病菌;常规PCR;SYBR Green实时荧光定量PCR;分子检测

期刊名称： 植物病理学报

ISSN： 0412-0914

年卷期： 2016 年 46 卷 01 期

页码： 1-10

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 凋萎病是近年来危害杨梅的主要病害。为了快速灵敏的检测杨梅凋萎病菌(Pestalotiopsis versicolor和P.microspora),本研究开发了常规PCR和SYBR Green实时荧光定量PCR技术各一套。利用P.versicolor(JN861773)和P.microspora(JN861776)的ITS1-5.8S rDNA-ITS2序列的相同部分设计引物对(Pvm1L/Pvm1R)。该引物对利用常规PCR技术能特异性扩增出杨梅凋萎病菌188 bp的目标产物而对照菌株则呈阴性。该常规PCR体系能够检测人工接种后21 d和田间自然发病的有病症杨梅组织中的凋萎病菌,检测下限是0.6×10~5拷贝数。利用Pvm1L/Pvm1R进行SYBR Green实时荧光定量PCR,检测灵敏度是常规PCR的100倍,检测下限是0.6×10~3拷贝数,能够检测出人工接种及田间已经感染但尚未表现症状的杨梅组织中的凋萎病菌。这两项技术简单、快速、灵敏特异性强,可以应用于杨梅凋萎病的诊断和苗木检疫。

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