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枣金属硫蛋白基因原核表达载体的构建

文献类型： 中文期刊

作者： 韩彩云 1 ; 曹秋芬 1 ; 马青兰 1 ; 孟玉平 1 ;

作者机构： 1.太原理工大学环境科学与工程学院;山西省农业生物技术研究中心

关键词： 金属硫蛋白基因;原核表达载体;构建

期刊名称： 太原理工大学学报

ISSN： 1007-9432

年卷期： 2009 年 04 期

页码： 388-390

收录情况： 北大核心

摘要： 以从枣树生长早期结果枝cDNA小规模测序获得的含2型金属硫蛋白基因的重组质粒pSPORT1-MT为模板,用PCR方法扩增出MT基因241bp特异片段,将其亚克隆入pBlue-scriptⅡSK-T载体,用限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ分别酶切重组pBluescriptⅡSK-T质粒和原核表达载体pET28a,然后将MT基因片段和表达载体pET28a通过T4DNA连接酶进行定向连接,用限制性内切酶BamHⅠ和HindⅢ酶切和PCR方法双重鉴定重组表达质粒。以pSPORT1-MT为模板扩增出大小为241 bp的片段,此片段与pBluescriptⅡSK-T载体连接后得到了亚克隆pBluescriptIⅡSK-MT载体,酶切回收了目的片段MT后,再次pET28a连接,得到了pET28a-MT原核表达载体。该重组表达载体经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后,切出了235bp的目的片段,证明MT基因原核表达载体构建成功。

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