文献类型： 中文期刊

作者： 刘畅 ¹ ; 卢清侠 ² ; 杨继飞 ² ; 王世红 ² ; 王寅彪 ² ; 郭官鹏 ¹ ; 邓瑞广 ² ; 张改平 ² ;

作者机构： 1.河南农业大学牧医工程学院

2.河南省农业科学院农业部动物免疫学重点开放实验室/河南省动物免疫学重点实验室

关键词： A型口蹄疫病毒;VP1蛋白;原核表达;蛋白纯化;活性鉴定

期刊名称： 西北农业学报

ISSN： 1004-1389

年卷期： 2013 年 22 卷 09 期

页码： 7-12

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为获得具有活性的A型FMDV VP1蛋白,以A型vp1重组质粒pMD19T-A-vp1为模板,利用PCR扩增得到A型FMDV vp1基因片段,将此基因片段与原核表达载体pET28a连接,构建重组质粒pET-Avp1。经IPTG诱导表达含重组质粒pET-A-vp1的E.coli BL21(DE3)菌后,SDS-PAGE显示VP1蛋白以包涵体形式获得高效表达,蛋白分子质量约为29ku。通过对IPTG浓度及诱导时间进行优化,结果表明,在37℃条件下,IPTG终浓度为0.3mmol/L,诱导表达6h后,VP1蛋白的表达量最大。Western-Blot分析表明,VP1重组蛋白能够被A型口蹄疫阳性血清特异性识别。ELISA检测结果显示,VP1包涵体蛋白经洗涤纯化,尿素浓度梯度透析复性后具有较高的活性。