文献类型： 中文期刊

作者： 崔颖磊 ¹ ; 刘运超 ¹ ; 冯华 ¹ ; 刘畅 ¹ ; 王彦伟 ¹ ; 杨棋 ¹ ; 王冬雨 ¹ ; 张改平 ¹ ;

作者机构： 1.河南农业大学牧医工程学院;河南省农业科学院动物免疫学重点实验室农业部动物免疫学重点实验室河南省动物免疫学重点实验室;江苏高校动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心

关键词： 分子伴侣;VP1蛋白;原核表达;可溶性表达

期刊名称： 河南农业大学学报

ISSN： 1000-2340

年卷期： 2018 年 03 期

页码： 350-355

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为获得具有活性的A型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)VP1蛋白,以重组质粒pUC57-MM-VP1为模板,利用PCR扩增得到A型FMDV VP1基因片段,并将该片段插入原核表达载体pET-28a构建重组质粒pET-28a-MM-VP1;之后将该质粒转入E.coli BL21(DE3)进行诱导,同时对诱导温度进行了优化。SDSPAGE显示,最佳诱导温度为18℃,VP1蛋白主要以包涵体形式高效表达;为了提高VP1蛋白可溶性表达,将重组质粒pET-28a-MM-VP1与pTF16共同转入E.coli BL21(DE3)进行诱导表达,并对表达条件进行优化。结果表明,分子伴侣有效提高了A-VP1重组蛋白的可溶性表达量,诱导最佳条件为18℃、0.1 mmol·L~(-1)IPTG、2 g·L~(-1)阿拉伯糖、诱导时间20 h。Western-Blot结果表明,得到的重组蛋白能够被抗FMDV的阳性血清识别,反应原性良好。