文献类型： 中文期刊

作者： 刘彩霞 ¹ ; 高盛杰 ¹ ; 寇丽君 ¹ ; 马勋 ¹ ; 王静 ¹ ; 孔翠莲 ¹ ; 史唯地 ¹ ; 吕双飞 ¹ ; 任慧杰 ¹ ; 康立超 ² ; 殷月兰 ³ ;

作者机构： 1.石河子大学动物科技学院

2.新疆农垦科学院农业质量标准与检测技术研究所

3.江苏省人兽共患病学重点实验室

关键词： 单核细胞增生性李斯特菌;毒力岛4;膜透性酶ⅡA;缺失株;毒力基因

期刊名称： 中国预防兽医学报

ISSN： 1008-0589

年卷期： 2022 年 012 期

页码： 1269-1276

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 为探究单核细胞增生性李斯特菌（LM）毒力岛4（LIPI-4）的膜透性酶ⅡA（EⅡA）基因在LM中的毒力作用，本研究利用同源重组技术构建了具有遗传稳定性的LM928菌株EⅡA基因缺失株（LM928ΔEⅡA）和回补株（CLM928ΔEⅡA），通过对缺失株、回补株和亲本株生长特性测定分析EⅡA基因对LM体外生长能力的影响。提取各菌株RNA，反转录为c DNA后通过real-time PCR检测各菌株在体外培养条件下LM重要毒力基因的转录水平，分析EⅡA基因缺失对LM毒力基因转录水平的影响。结果显示，缺失EⅡA基因后不影响细菌在体外的生长能力，但细菌plcB和inlA基因的转录水平显著下调（P＜0.05）,hly、prfA、plcB、inlA、inlB、inlC和mpl基因的转录水平极显著下调（P＜0.01）,plcA基因的转录水平极显著上调（P＜0.01），而actA基因的转录水平无明显变化（P＞0.05）。将LM928、LM928ΔEⅡA和CLM928ΔEⅡA菌株分别感染人脑微血管内皮细胞（HCMEC/D3）后，采用CCK8法检测EⅡA基因对HCMEC/D3活性的影响，同时通过胞内增殖试验检测EⅡA基因对LM胞内增殖的影响，进一步采用real-time PCR方法检测EⅡA对细胞毒力基因转录水平的影响，结果显示，与LM928组相比，LM928ΔEⅡA组HCMEC/D3细胞活性无明显改变；LM928ΔEⅡA感染HCMEC/D3后6 h～12 h，胞内LM928ΔEⅡA载菌量极显著高于胞内LM928载菌量（P＜0.01），在感染HCMEC/D3后2 h～12 h，胞内LM928ΔEⅡA载菌量也极显著高于胞内CLM928ΔEⅡA的载菌量（P＜0.01）。相对于亲本株，LM928ΔEⅡA感染的细胞中毒力基因prf A、plc A、plc B、inl A、 inl B、inl C和mpl转录水平均极显著上调（P＜0.01）,actA基因的转录水平显著上调（P＜0.05）,hly基因的转录水平极显著下调（P＜0.01）。本研究结果首次证实LIPI-4中EⅡA基因对LM体外生长无影响，但其对体内、外LM毒力因子的转录均具有显著的调控作用，提示LM LIPI-4可能通过EⅡA参与调控细菌毒力，该结果为进一步研究LIPI-4在LM致病中的作用奠定了基础。