文献类型： 中文期刊

作者： 任武泽 ¹ ; 潘洁 ² ; 孙世铎 ¹ ; 庄娟 ³ ; 徐泉兴 ² ; 饶忠 ² ; 尤永进 ² ;

作者机构： 1.西北农林科技大学动物科技学院

2.上海农科院畜牧兽医研究所上海市动物基因工程研究重点实验室

3.南京师范大学生命学院

关键词： 抑制;病毒复制;RNAi;哺乳动物细胞

期刊名称： 中国兽医学报

ISSN： 1005-4545

年卷期： 2004 年 24 卷 05 期

页码： 453-456

收录情况： 北大核心 ; CSCD

摘要： 根据口蹄疫病毒 IRES和 L 串联序列两侧的保守区域设计了 2个引物 ,利用 RT- PCR和 PCR方法扩增出该串联序列 ,并进行了测序。测序结果表明 ,扩增产物与 Gen Bank上相应的序列具有很高的序列同源性 (大于 99% )。在测序的基础上 ,选择了 L 基因上的 1个靶位点 (位于启始密码子下游第 2 2 9nt后 2 1 nt长的序列 ) ,合成了 si RNA表达盒SEC- L2 2 9。细胞单层长成 5 0 %～ 70 %时 ,将纯化的 SEC- L2 2 9转染到 BHK细胞中 ,转染 4 h后用高感染复数 FMDV接种 ,2 4 h后用间接免疫荧光方法对口蹄疫病毒在 BHK细胞中的复制进行检测。研究结果表明 ,SEC- L 2 2 9极大地抑制了口蹄疫病毒在 BHK细胞中的复制 ,且该抑制作用具有序列特异性 ,并降低了 BHK细胞的死亡率。另外 ,2 5 ng和5 0 ng SEC- L2 2 9处理组间对病毒复制的抑制作用差异不明显 ,可能是病毒基因组发生了突变。本试验表明 ,利用 PCR方法合成的 SEC在 BHK细胞中能特异性地抑制 FMDV的复制 ,RNAi技术可能为防治口蹄疫提供一个新的途径